Метод изучения клетки крови

Этими анализами определяются специфические вещества, которые выделяются опухолями Также онкомаркерами могут выступать клетки, выделяемые нормальными тканями ответ на наличие онкологического процесса Чем выше содержание этих веществ, тем вероятнее наличие опухоли. А нарушение целостности мембраны изменение pH, несоблюдение времени фиксации клеток, нарушение температурного режима, механики опыта. При изучении эритроцитов наилучшим способом оказалось приготовление препарата методом мазка, при высушивании его на воздухе Такой способ дает более адекватную картину размещения клеток на препарате При большем приближении зонда и использовании фильтра карта латеральных сил возможна оценка цитоскелета эритроцита, 3D изображении оценка особенностей мембраны клетки. Рисунок 2 Сканирующий электронный микроскоп полевой эмиссии с комплексной системой микроанализа. При фиксации клеток крови их помещают раствор желатиноля из расчета 1 мл крови на 4 мл раствора и добавляли глутаровый диальдегид так, чтобы его концентрация растворе была 0, 5 Затем клетки фиксируют течение 10 мин, после этого их осаждают и сливают раствор фиксатора К клеткам добавляют 1 раствор глутарового диальдегида физиологическом растворе Общее время фиксации составляет 60 мин Затем клетки троекратно промывают дистиллированной водой Готовые образцы клеток наносят на стекло или металлическую подложку Если необходимо зафиксировать ткань с находящимися на ней клетками крови, целесообразно поместить ткань раствор желатина и первый этап фиксации проводить аналогично описанному для клеток крови. Рисунок 3 Эритроциты просвете сосуда миометрий Изображение получено с помощью.

Для проведения элементарного анализа используется детектор для регистрации спектров характеристического рентгеновского излучения фирмы EPAX, детекторы интегрированы с растровым электронным микроскопом Qnta 600 FEG Микроэлементный анализ основан на возникновении непрерывного флуоресцентного излучения при бомбардировке исследуемых образцов пучком первичных рентгеновских лучей Рентгеноспектральный анализ может быть использован для количественного определения элементов микрообъёмах материалов сложного химического состава Основу микроанализатора составляет микрофокусная рентгеновская трубка, объединённая с оптическим микроскопом. Ещё одним методом исследования крови является реологическое исследование, определение вязкости цельной крови Вязкоэластичные свойства крови зависят от многих параметров вязкость плазмы, деформации красных кровяных тел, образования скоплений и гематокрита Наблюдается зависимость вязкости крови от количества и объема эритроцитов, общего содержания белка и соотношения его фракций плазме, а также от содержания крови углекислоты Углекислый газ повышает вязкость крови, а кислород понижает, поэтому вязкость венозной крови несколько больше, чем артериальной Фактически этот показатель связан с количеством белков плазмы, дисперсностью, величиной коллоидальных частиц белка, и количеством и качеством взвешенных плазме кровяных шариков Повышение вязкости отмечается при сгущении крови и некоторых видах лейкозов эритремии, миелофиброзах, опорожнении депо крови, содержащей большее число эритроцитов, обильном белковом питании, потении, венозных застоях, острых экссудативных процессах, понижение при первичных и вторичных анемиях. В методе максимального давления поверхность пузырька A процессе его роста расширяется Для учета этого явления используют вместо измеряемого физического времени t f так называемое эффективное время жизни t eff которое соответствует недеформируемой поверхности жидкости Такой прием позволяет сравнивать различные методы, поскольку результаты измерений данном случае не зависят от способов измерений. Рисунок 6 Динамическая тензиограмма сыворотки крови человека координатах физического времени. Глава 2 Методы исследования клеток крови, органов кроветворения и системы гемостаза. FISHгибридизация может применяться для различных целей с использованием зондов трех типов. Оно характеризует функциональную активность тромбоцитов и взаимодействие тромбоцитов с сосудистой стенкой, но не выявляет всех тромбоцитарных нарушений Этот скрининговый тест позволяет заподозрить тромбоцитопатии различного генеза, болезнь Виллебранда и нарушения проагрегантных свойств сосудистой стенки Метод мало поддается стандартизации и подвержен большому влиянию внешних факторов глубина прокола кожи, температура конечности, уровень артериального давления Не должен использоваться для предоперационного планового скрининга. В зависимости от цели, преследуемой врачами диагностами, существуют различные методы исследования крови. Эритроциты еще одни клетки крови, подсчет которых производится при данном анализе Они отвечают за перенос кислорода по тканям организма Белок гемоглобин является главным инструментом транспортировки кислорода и именно благодаря нему, кровь обладает таким цветом При гематологическом исследовании крови также производится определение содержание гемоглобина эритроцитной массе и отдельной клетке, изучение объема эритроцитов Такие параметры являются крайне важными для диагностики и успешного лечения такого заболевания как анемия и определения ее причины дефицит какихлибо веществ, потеря крови и Важнейшую роль определении наличия воспалительных, онкологических процессов, анемии, эндокринных нарушений организме является скорость оседания эритроцитов Этот показатель также является частью гематологического исследования. Биохимическое исследование крови это вид лабораторной диагностики, целью.

Для оценки противосвертывающей системы принято определение активности антитромбина III и косвенное определение концентрации гепарина тест свободный гепарин. Данные методы широко применяются для диагностики различных заболеваний и, основываясь на показаниях этих первых, общедоступных приемов, уже с первых часов лечения больных с учетом клинических показателей их состояния, можно оценить эффективность, содержание и интенсивность мероприятий по оказанию им помощи. Микроскопия темном поле В темнопольном микроскопе только свет, который дает дифракцию структур препарате, достигает объектива Про исходит это благодаря наличию микроскопе специального конденсора, который освещает препарат строго косым светом лучи от осветителя на правляются сбоку Таким образом, поле выглядит темным, а мелкие части цы препарате отражают свет, который далее попадает объектив Разре шение этого микроскопа не может быть лучше, чем у светлопольного мик роскопа, так как используется такая же длина волны Но здесь достигается больший контраст Он используется для изучения живых объектов, автора диографических объектов, например зерен серебра, которые выглядят свет лыми на темном поле В клинике его применяют для изучения кристаллов моче мочевая кислота, оксалаты, для демонстрации спирохет, частно сти treponema pallidum вызывающей сифилис. Исследование фиксированных клеток и тканей Основным объектом ис следования являются гистологические препараты, приготовленные из фик сированных структур Препарат может представлять собой мазок напри мер, мазок крови, костного мозга, слюны, цереброспинальной жидкости и др, отпечаток например, селезенки, тимуса, печени, пленку из ткани например, соединительной или брюшины, плевры, мягкой мозго вой оболочки, тонкий срез Наиболее часто для изучения используется срез ткани или органа Гистологические препараты могут изучаться без спе циальной обработки Например, приготовленный мазок крови, отпечаток, пленка или срез органа могут сразу рассматриваться под микроскопом Но вследствие того, что структуры имеют слабый контраст, они плохо выявля ются обычном световом микроскопе и требуется использование специаль ных микроскопов фазовоконтрастные и др Поэтому чаще применяют специально обработанные препараты. Метод культивирования клеток позволяет изучать их жизнедеятельность, раз множение, дифференцировку, взаимодействие с другими клетками, влияние гор монов, факторов роста. В качестве питательных сред используют смеси солей, аминокислот, витами нов, лошадиной сыворотки, экстракт куриных эмбрионов, эмбриональную сыво ротку и др В настоящее время разработаны специальные среды для культивирова ния различных типов клеток Они содержат один или несколько белковых факторов роста, необходимых клеткам для жизнедеятельности и размножения Например, для роста нервных клеток необходим фактор роста нервов. Методы иммунофлюоресцентного анализа широко и эффективно ис пользуются современной гистологии Эти методы применяются для изуче ния процессов дифференцировки клеток, выявления них специфических химических соединений и структур Они основаны на реакциях антиген антитело Каждая клетка организма имеет специфический антигенный со став, который главным образом определяется белками Продукты реакции можно окрашивать и выявлять люминесцентном микроскопе, например выявление актина и тубулина клетке с помощью метода иммунофлюорес центного анализа см главу.

Фракционировать структуры и макромолекулы клеток можно различны ми методами ультрацентрифугированием, хроматографией, электрофо резом Подробнее эти методы описаны учебниках биохимии. Для разделения вышеуказанных компонентов клетки применяют высо коскоростную центрифугу 80 000150 000 оборотов мин Вначале оседают седиментируют на дне пробирки более крупные части ядра, цитоскелет При дальнейшем увеличении скоростей центрифугирования надосадочных фракций последовательно оседают более мелкие частицы сначала мито хондрии, лизосомы и пероксисомы, затем микросомы и мельчайшие пу зырьки и, наконец, рибосомы и крупные макромолекулы При центрифу гировании различные фракции оседают с различной скоростью, образуя пробирке отдельные полосы, которые можно выделить и исследовать Фрак ционированные клеточные экстракты бесклеточные системы широко ис пользуют для изучения внутриклеточных процессов, например для изуче ния биосинтеза белка, расшифровки генетического кода. Электрофорез позволяет разделить белковые молекулы с различным зарядом при помещении их водных растворов или твердом пористом матриксе электрическом поле. Морфометрические методы позволяют определять с помощью специаль ных сеток Е Вейбеля, А А Глаголева, С Б Стефанова число любых структур, их площади, диаметры и др В частности, клетках могут быть измерены площади ядер, цитоплазмы, их диаметры, ядерноцитоплазматические отношения и др Существуют ручная морфометрия и авто матизированная морфометрия, при которой все параметры изме ряются и регистрируются приборе автоматически. Необходимость эффективного учета показателей крови ряде клинических ситуаций стала основой создания автоматизированных проточных систем ее анализа.

Проведение цитохимических исследований также важно процессе изучения злокачественной транс формации клеток при лейкозе, что имеет огромное значение для дифференциальной диагностики гематологических заболеваний Стабильность цитохимических особенностей каждого вида клеток крови позволяет определять даже морфологически нерас познаваемые бластные клетки костного мозга. Сочетание классических старых методов с анализом изображения, компьютеризацией и другими современными техническими средствами открывают новые пути для объективизации, повышения произ водительности труда и воспроизводимости результатов, создания. Разумеется, это свойство крови немедленно отражается как на всем гемопоэзе, так и на морфологических особенностях клеток периферического кровотока Именно эти реактивные состояния последнего служат объектом изучения и диагностики болезней при лабораторных ее исследованиях, поскольку отражают ту или иную патологию организма как целостной живой системы. Современные проточные системы получили развитие с середины 50х гг прошлого столетия, после того, как W Countler 1956 сконструировал прибор для автоматического подсчета и анализа клеток крови Работа этого прибора обеспечивалась им же ранее запатентованным кондуктометрическим методом, улучшенным затем гидродинамической фокусировкой, позволяющей осуществлять выстраивание клеток по центру проточного канала за счет разницы давлений между потоком клеточных суспензий и обтекающим их раствором Впоследствии были разработаны электронные счетчики клеток, основывающиеся на радиочастотных измерениях. Приборы, позволяющие применять оптические принципы регистрации сигналов поглощение, рассеивание света и флюоресценцию, описаны впервые середине 60х гг XX хотя возможность применения этого метода изучалась значительно раньше, но регистрация данных не отличалась достаточной чувствительностью.

Далее рассматриваются основы метода проточной цитометрии, принципы измерения параметров клеток и приборы, используемые для цитометрического анализа, используемые гематологии. При анализе определенного обычно не менее 10000 количества объектов информацию накапливают и представляют виде частотной гистограммы распределения Последнюю составляют посредством установки шкалы интенсивности по оси абсцисс эквивалентно значениям измерения параметра каждой клетки по оси ординат обозначают количество клеток с данным значением измеряемого параметра. По обе стороны от капилляра апертуры находятся электроды, между которыми поддерживается постоянный ток Поскольку электрическое сопротивление клетки значительно превышает аналогичное сопротивление электролита, момент прохождения клетки через апертуру ее электрическое сопротивление резко возрастает. При прохождении апертуры объектом токе высокой частоты также возникают сигналы, амплитуда которых зависит от размеров ядра его ядерного матрикса и цитоплазматических включений Эти сигналы значительной степени отражают характер внутренней структуры клеток. С возрастанием угла рассеивания увеличивается значение рефракционных эффектов Поскольку рефракционные лучи пересекают содержимое клетки, регистрируемые при этом сигналы большей степени отражают внутриклеточную микроструктуру. Поляризация светорассеивания используется специальной технологии MAPS поляризация многоуглового светорассеивания, используемой гематологических анализаторах фирмы Abbott для дифференцировки эозинофилов и базофилов.

Оборудование 1го уровня это наименее дорогие приборы, оснащенные относительно слабым источником света обычно аргоновым лазером с воздушным охлаждением Эти приборы предназначаются для повседневных исследований и применяются диагностических лабораториях при клинических медицинских центрах и крупных больницах. Предусмотрено 2 метода взятия пробы автоматический закрытые пробирки, объем пробы 250 мкл, производительность 120 анализов час и ручной закрытые пробирки, объем пробы 125 мкл, производительность 60 анализов. В приборе предусмотрено 4 канала для детекции сигналов, 2 канала работают с применением кондуктометрического принципа измерения объема лейкоцитов Отдельный канал служит для регистрации содержания базофилов здесь также используется кондуктометрический способ измерения объема Предварительная обработка пробы включает дифференциальный лизис клеток. На каждом этапе классификации изображений лейкоцитов последние объединяются по группам признаков промежуточные классы Классифицированные таким образом клетки переносятся на следующие этапы, где классификация уточняется с использованием следующего набора признаков. Для этого прибор комплектуется запатентованными устройствами механизации и автоматизации подготовки пробы к анализу, причем такому, при котором все клетки препарате лежат раздельно, сохраняя свою геометрию, структуру, текстуру, оптическую плотность, цвет, яркость и тинкториальные свойства эритроциты круглые безъядерные клетки розового цвета с центральным просветлением пеллором нейтрофилы клетки с сегментированным ядром и плотной зернистой цитоплазмой лимфоциты и моноциты мононуклеарные клетки, отличающиеся размерами и плотностью ядра и цитоплазмы тромбоциты небольшие, морфологически неоднородные клетки.

Однако, безусловно, он уступает проточным счетчикам быстродействии, но при этом обладает рядом преимуществ он способен распознавать большое количество типов клеток он обучаем процессе работы увеличивается количество распознаваемых типов клеток весьма важное значение имеют визуализация результатов исследования и возможность корректировки результатов компьютеризация резко расширяет базу получаемых при анализе данных, при этом сохраняется возможность сравнения результатов используемые материалы сравнительно дешевы. Отзыв Тамары Мне было очень плохо, и я не могла решить свою проблему с выпивками самостоятельно Пришла на прием к Владимиру Анатольевичу Цыганкову и за один сеанс я почувствовала себя намного лучше На душе стало спокойно, настроение улучшилось, нет тяги к алкоголю Могу сама жить без спиртного и чувствовать радость от того, что способна управлять своей жизнью. Отзыв Павла Поставил защиту от алкоголя полгода назад Получил хорошее самочувствие, начал сбрасывать лишний вес, да и семье все наладилось Решил поставить защиту еще на год Благодарю сотрудников центра Владимира Цыганкова за вниматеьное отношение и квалифицированную помощь. Отзыв Степана Тимофеевича Я пил почти каждый день долгие годы Потом принял решение поставить защиту от алкоголя и не нуждаться нем больше Но для того, чтобы поставить защиту от алкоголя требовалось не пить семь дней, а я не мог уже и одного дня не пить Помог мне СтопалкогольЭлит Я стал пить отвар этого фитосбора и уже через несколько дней заметил, что заметно снизилась тяга к алкоголю, самочувствие стало лучше Я сделал над собой небольшое усилие, не пил семь дней и записался на сеанс постановки защиты по методу снятия подсознательных барьеров центр Владимира Анатольевича Цыганкова После этого не пью уже 8 лет Я очень благодарен В А Цыганкову Дай Бог ему много лет жизни и хорошего здоровья. Отзыв Станислава Михайловича Когда я впервые прошел сеанс по методу снятия подсознательных барьеров, то продержался без спиртного недолго через 9 месяцев начал пить снова, хотя защита от алкоголя была на 1 год Выпить уговорили друзья, сказали, мол, ничего страшного не произойдет, срок неупотребления уже подходит к концу По глупости я послушался из выпил и запои вновь вернулись Я записался снова центр Владимира Цыганкова на сеанс по методу снятия подсознательных барьеров Мне поставили защиту от алкоголя сначала на 6 месяцев, потом на 1 год Полтора года уже не пью и чувствую себя прекрасно Второй раз ошибки не совершу, никому не удастся уговорить меня выпить Мне этого не хочется и не надо И поэтому защиту от алкоголя продлю опять.

Отзыв Ирины Ивановны Мой сын был запойный, более 10 лет пьянствовал беспробудно Что я только ни перепробовала, ничего не помогало его вылечить Но однаждыя с помощью психолога Владимира Анатольевича Цыганкова отказалась от ненужных и неправильных действий, а стала делать то, что реально может замотивировать сына на прекращение пьянства и лечение Дела пошли гору Сын сам пошел центр Владимира Анатольевича, поставил защиту от алкоголя по методу снятия подсознательных барьеров Теперь уже четыре года прошло, как он не пьет совсем Теперь я понимаю, что роль матери бесконечно огромна деле реальной помощи сыну. Отзыв Дарьи Я благодарна психологам центра Владимира Цыганкова за то, что они помогли мне увидеть свою страшную болезнь созависимость от пьющего мужа Они дали мне мне возможность адекватно посмотреть на себя, на мужа, на нашу жизнь и сделать необходимые шаги для создания трезвой, здоровой семьи. В биохимическом анализе крови можно исследовать больше 40 показателей В каждом конкретном случае врач назначает пациенту, какие именно показатели биохимии крови необходимо исследовать. Основными методами биохимического анализа крови являются биохимические реакции После проведения необходимой реакции кровь исследуют с помощью специальной аппаратуры, например, фотоэлектроколориметра Для проведения расчетов часто используют построение специальных калибровочных графиков Во время исследования биохимии крови применяются химические реактивы, необходимые приборы. Похудание, часто сочетающееся с потерей аппетита, особенно выражено при злокачественных заболеваниях крови лейкозы, лимфомы Иногда отмечается своеобразное изменение извращение вкуса и обоняния например, пристрастие к употреблению мела, угля, запаху бензина, что наблюдается у больных с железодефицитной анемией хлороз. Бледность бывает обусловлена анемизацией, а покраснение кожи эритроцитозом, хотя преходящая бледность может быть связана с воздействием холода, а эритематозный цвет лица с частым употреблением алкоголя, действием как низкой, так и высокой температуры и Более надежный признак анемии и эритроцитоза бледный цвет слизистых оболочек и ногтевых лож Желтушная окраска кожи и слизистых оболочек нередко бывает при гемолизе. Обычно исследуют капиллярную кровь, получаемую при уколе мякоть IV пальца левой руки, или кровь из локтевой вены При этом используют иглыскарификаторы, которые затем моют и стерилизуют кипячением или помещая на 2 сушильный шкаф при температуре. Увеличение крови числа эритроцитов эритроцитоз может быть кратковременным например, при большой физической нагрузке, условиях горной местности или носить более длительный характер хроническая легочная недостаточность, врожденные пороки сердца, эритремия, опухоли почки Обычно и том, и другом случае отмечается увеличение содержания гемоглобина. Клинические проявления геморрагического синдрома позволяют иногда предположить его причины Так, петехии мелкие кровоизлияния на коже чаще связаны с недостатком числа тромбоцитов или повреждением сосудистой стенки, большие подкожные кровоизлияния экхимозы позволяют предположить нарушение свертываемости крови вследствие болезни печени, гемартрозы указывают на гемофилию. Коагуляционный гемостаз характеризуется интегральным показателем коагуляции временем свертывания цельной крови Клиническое значение имеет также определение тромбинового и протромбинового времени, протромбинового индекса, ряда других показателей.

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Амурская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации. Изобретение относится к клинической медицине, частности к клинической гематологии, и касается поиска новых возможностей изучения клеток сгустка крови с целью использования их при обследовании больных. Фиг 2 жидкая часть сгустка крови у больного циррозом печени вне обострения при нормальной функции печени Мужчина 46. Фиг 4 жидкая часть сгустка крови у больного хроническим вирусным гепатитом С, период обострения Мужчина 48. Концентрация гемоглобина HGB большинстве гематологических анализаторов определяется гемиглобинцианидным методом Некоторые особенности крови при заболеваниях могут привести к завышению результатов определения гемоглобина лейкоцитоз более 30 10 9, парапротеинемия, гипербилирубинемия, внутрисосудистый гемолиз эритроцитов. Количество эритроцитов единице объема крови RBC гематологическими анализаторами определяется кондуктометрическим методом Ошибки при подсчете количества эритроцитов, связанные с особенностями исследуемой крови, могут привести как к занижению результатов гемолиз и агглютинация эритроцитов, наличие большого количества микроцитов и шизоцитов, так и к завышению результатов исследования наличие патологически крупных тромбоцитов или их агрегатов, высокого лимфоцитоза с преобладанием малых лимфоцитов.

Количество лейкоцитов WBC гематологическим анализатором может быть заниженным при наличии агглютинатов лейкоцитов и завышенным при наличии патологических макроформ тромбоцитов, агрегатов тромбоцитов, парапротеинемии. Большинство гематологических анализаторов дифференцирует лейкоциты зависимости от их объема на два, три, пять и более видов лейкоцитов Результаты исследования отражаются лейкоцитарных гистограммах и цифровом выражении относительного и абсолютного количества различных видов лейкоцитов Точная дифференцировка лейкоцитов на отдельные популяции, выявление тонких морфологических изменений возможны только с помощью микроскопического исследования окрашенного мазка крови Дифференцированный подсчет лейкоцитов гематологическим анализатором это скрининг, при котором все патологические результаты подлежат последующему микроскопическому исследованию. Обычные методы световой микроскопии трудно использовать для воспроизведения трехмерной картины изучаемого объекта изза небольшой глубины резкости микроскопа Обычно клетки рассматриваются как оптические разрезы на данной глубине фокуса Для того чтобы получить полную трехмерную реконструкцию объекта, используют специальный конфокальный сканирующий световой микроскоп С помощью этого прибора получают серии последовательных оптических срезов, взятых с различной глубины и изображения которых накапливаются компьютере, и по специальной программе реконструируется трехмерное, объемное, изображение объекта Обычно используются объекты, окрашенные флуорохромами. После фиксации объекты дальнейшем можно подвергать дополнительной обработке Одной из главных таких обработок является окрашивание клеток Именно дополнительное окрашивание клеток позволило выявить них массу деталей. Существует целый ряд специфических приемов окрашивания, прямо выявляющих те или иные вещества Это собственно гистохимические цитохимические реакции Основные требования, предъявляемые к такого рода реакциям, следующие специфичность связывания красителя, неизменность локализации вещества. Методы электронной микроскопии Метод реплик Метод декорирования Амплитудная электронная микроскопия Фазовая электронная микроскопия Лоренцова электронная микроскопия Количественная электронная микроскопия. Причины и механизм этих фазовых переходов зависят от средней скорости доставки кислорода, определяющей изменения массопереноса частиц, что свою очередь определяет динамику температурных показателей исследуемых активных точек. Нервномышечную проводимость, склонность к спазмам, мышечной слабости на основе исследования содержания К, Na, Ca, Mg крови.

Болезненность при надавливании или поколачивании области грудины, других плоских или трубчатых костей. В норме селезенка не пальпируется Если же пальпируется, то это говорит о ее увеличении 1, 52 раза. Увеличение ретикулацитов наблюдается после кровотечений, при гемолитической анемии. Диагностическая значимость различных методов изучения морфологии клеток крови. На протяжении многих лет единственным методом изучения морфологии клеток крови являлась ручная иммерсионная микроскопия В настоящее время арсенале врача клинической лабораторной диагностики имеются несколько методов цитоанализа В связи с этим встает вопрос о целесообразности использования отдельных методов, частности о том, надо ли анализировать клетки крови под микроскопом. Каждая методика цитоанализа крови автоматическая, проточная, ручная микроскопия, диалоговая микроскопия имеет принципиальные преимущества и ограничения Повсеместное внедрение гематологических анализаторов, безусловно, позволило существенно повысить точность результатов, получить дополнительные морфометрические характеристики клеток крови. Проблема выявления атипии связана не с концентрацией таких клеток, а с ограничением их распознавания на основе современных систем разрешения. В практике мы сталкивались с тем, что гематологическая станция ADVIA 2120 Siemens при наличии у пациента дисгранулоцитопоэза относила часть клеток нейтрофильного ряда к моноцитам. Автоматизированная методика хорошо зарекомендовала себя как средство надежного сбора представительной выборки эритроцитов Эта методика избавляет врача от иммерсионной микроскопии, переводя его работу на экран компьютера Пересортировка обычно касается 5 10 предварительно расклассифицированных эритроцитов.

Условия взятия крови и ее сохранность до начала лабораторных исследований имеют важное значение при получении достоверных результатов Во многом эти результаты зависят от техники взятия крови и используемых при этой инструментов В организме различает артериальную, венозную и капиллярную кровь, которая имеет незначительные цитологические и биохимические отличия Для морфологических исследований пользуются почти исключительно капиллярной кровью, а при биохимических венозной. Повышение некоторые формы гемобластозов, частности эритремия, обезвоживание организма. При широкомасштабных испытаниях гемихромного метода было показано, что интервале концентраций гемоглобина от 40 до 200 калибровочные графики гемиглобинцианида и гемихрома представляют прямую линию, выходящую из начала координат, а близкие углы наклона прямых указывают на сопоставимость обоих методов. Использование фотометрических или кондуктометрических принципов позволило создать автоматические счетчики и гематологические автоматы для лабораторных исследований Форменные элементы крови либо перекрывают световой луч специального сканирующего микроскопа, либо изменяют сопротивление между электродами капилляра, по которому протекает разбавленная кровь, при этом возникает импульс, регистрируемый счетным устройством. Количество эритроцитов и лейкоцитов крови здоровых животных колеблется широких пределах табл. Методика подготовки животного зависит от метода отбора проб мочи Уретральная катетеризация связана с наибольшим риском бактериального заражения Для проведения катетеризации требуется асептическая методика, включая использование стерильного катетера Для снижения возможности бактериального заражения некоторые практикующие врачи после сбора мочи проводят инфузию антибиотических средств мочевой пузырь Отсутствие необходимой квалификации для проведения катетеризации маленьких собак может быть причиной, по которой многие практикующие врачи не проводят исследование мочи. Эпителиальные клетки мочевом осадке имеют различное происхождение, их слущивание происходит с органов, покрытых различными видами эпителия плоского эпителия, переходного эпителия, почечного эпителия Небольшое количество эпителиальных клеток моче является нормой, почти всегда мочевом осадке встречаются клетки плоского эпителия и переходного эпителия Клетки плоского эпителия, попадающие мочу из влагалища, наружных половых органов и мочеиспускательного канала особого диагностического значения не имеют Переходный эпителий выстилает слизистую мочевого пузыря, мочеточников, почечных лоханок, крупных протоков предстательной железы Повышенное количество клеток переходного эпителия может быть связано с воспалительным процессом, интоксикациях, мочекаменной болезни или опухолью мочевых путей При обнаружении осадке мочи конгломератов и пластов эпителиальных клеток, умеренно или значительно различающихся по величине и структур, необходимо дальнейшее исследование для определения возможной злокачественности этих клеток Тогда из капли осадка мочи делают мазок для цитологического исследования Единичные препарате клетки почечного эпителия на фоне нормальной микроскопической картины мочевого осадка не дают основания говорить о патологии Клетки почечного эпителия можно обнаружить мочевом осадке при поражении паренхимы почек, интоксикациях, расстройствах кровообращения Обнаружение клеток почечного эпителия вместе с цилиндрами говорит нам о тяжелом поражении почек. Между двумя пиками имеется зона так называемых средних лейкоцитов 90120 фл, которая лучше всего коррелирует с моноцитами по этой причине некоторых анализаторах клетки этой области указываются как моноциты Однако, учитывая тот факт, что коэффициент корреляции с моноцитами R 0, 5 0, 8 сравнительно невысок, более корректным является название параметра средние лейкоциты или средние клетки MID Практически область средних клеток могут частично попадать базофилы, эозинофилы, различные патологические формы. Полученные по трем каналам данные с помощью электроники комбинируются и анализируются, результате чего происходит распределение клеток по дифференцировочным кластерам и, таким образом, лейкоциты разделяются на пять основных популяций лимфоциты, моноциты, нейтрофилы, эозинофилы и базофилы рис 16 не приводится Результатом отображения объемного графика на плоскости является лейкоцитарная скатерограмма, на которой каждый тип клеток имеет свою зону расположения.

Таким образом, использование приборов с полным дифференцированным подсчетом лейкоцитов 5Diff позволяет повысить точность дифференциального подсчета лейкоцитов, провести скрининг нормы и патологии, динамический контроль за лейкоцитарной формулой и резко сократить ручной подсчет лейкоцитарной формулы, оставляя примерно до 15 20 образцов крови для световой микроскопии. В других современных бесциановых методах используются компоненты гемихромной реакции, которые совместимы с подсчетом лейкоцитов и их дифференциацией на три популяции Высокая скорость реакции достигается путем быстрого лизиса эритроцитов, денатурирования и окисления гемоглобина до Fe 3 с помощью окислителей присутствии поверхностноактивных веществ При этом качестве лигандов атомов железа гема используются отличные от цианида вещества. Данная модель автоматического гематологического анализатора обеспечивает исследование крови по 18 параметрам, включая дифференцировку лейкоцитарной формулы по трем основным популяциям лимфоциты, моноциты, гранулоциты и получение гистограмм распределения по размерам клеток для эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов. Простое и удобное управление анализатором, использование интернациональных символов при выборе режимов исследования позволяют работать на данной системе операторам с разным уровнем подготовки Автоматическая очистка иглы пробоотборника, система автоматической промывки, мониторинг состояния апертур, отсутствие необходимости ежедневном обслуживании обеспечивают повышенную надежность работы системы и уровень безопасности для оператора, гарантируют точность получаемых результатов. Три определяемых пользователем диапазона нормальных значений для анализа разных групп пациентов. Высокая воспроизводимость характеристик раствора гемиглобинцианида, который сохраняет свои свойства при надлежащем хранении долгие годы, том числе коэффициента пересчета оптической плотности концентрацию гемоглобина или фактора калибровки.

Козинец Г И Погорелов В М Шмаров Д А и др Клетки крови современные технологии их анализа М, ТриадаФарм, 2002, с. Pollard Y Watts M J Grant D et al Use of the haemopoietic progenitor cell count of the SYSMEX SE9500 to refine apheresis timing of peripheral blood stem cells Br J Haematol, 1999, v 106, p 538. Организм человека является чувствительным прибором нативным биосенсором, который пропускает и преобразует неограниченное количество встречных волновых потоков вмещает огромные объёмы информации не только об организме, но и о близком и дальнем окружении человека и даже о Космосе и Вселенной. После точки бифуркации происходит расширение возможностей выздоровления, открывается резервный потенциал, появляются тенденции к реактивности иммунной системы и переход новое качественное состояние с новым режимом функционирования Если нет чувствительности к малым возмущениям клетках, то система заблокирована и возникает болезнь, патология, регресс Энергоинформационная коррекция помогает организму моделировать оптимальные условия восстановления, предупреждать болезни, стимулировать регенерацию определённых органов или систем, регулировать оздоровительные процедуры. Гематология наука о строении и функции крови и органов кроветворения Гематология изучает форменные элементы крови, их происхождение и развитие, качественные и количественные изменения крови и кроветворных органов при физиологических и патологических состояниях организма, при заболеваниях системы крови История гематологии берет свое начало с 17 века В то время были открыты впервые клетки крови эритроциты голландцем А Левенгуком 1673, итальянцем М Мальпиги, англичанином У Хьюсоном Но и после этого открытия изучение крови и болезней крови заключалось лишь систематизации и описании симптомов, классификацией болезней Только конце XVII века, когда французский ученый, врач Л Малассе изобрел специальную камеру для подсчета клеточных составляющих элементов крови, стало возможным более глубокое изучение проблемы В конце 19 века ученые смогли изучить строение и функции тромбоцитов Примерно это же время ученые научились подсчитывать клеточные элементы крови и стали связывать эти изменения с различными заболеваниями, включая болезни крови и кроветворных органов Следующим прорывом гематологии стало изучение системы кроветворения, освоение процедуры стернальной пункции области грудины для исследования костного мозга Во второй половине 20 века появилось учение о переливании крови На сегодняшний день всесторонне изучаются стволовые клетки организма человека и животных Гематология включает себя три отрасли, которые охватывают все вопросы практических и теоретических вопросов Общая гематология Этот раздел занимается всевозможными анемиями малокровие, цитопениями уменьшение количество клеточных элементов Онкогематология Занимается диагностикой и лечением таких заболеваний, как лейкозы острые и хронические, миеломная болезнь, лимфомы и миелолейкозы Эти все болезни относятся к злокачественных образованиям костного мозга как органа кроветворения и системы крови целом Теоретическая гематология Изучает экспериментальным путем и теоретическими методами генетические отклонения, возможности трансплантации костного мозга, способности стволовых клеток и другие вопросы Отдельной графой гематологии выделяются работы со стволовыми клетками, которые позволяют лечить практически неизлечимые заболевания На сегодняшний день кровь исследуют тремя основными методами 1 Бактериологосерологический метод применяют для обнаружения крови возбудителей различных инфекционных болезней или их токсинов, антитоксинов, агглютининов и 2 Морфологический морфологобиологический метод используют при исследовании клеточных форм крови, кроветворных органов здоровых и больных животных этим же методом изучают изменения и других органах и тканях Кроме диагностического значения, морфологические исследования представляют интерес и для установления прогноза болезни 3 Биохимическим физикохимическим методом изучают изменения химического состава крови сюда относятся определение солей кальция, калия, хлора и др, исследование некоторых физических и физикохимических свойств крови удельный вес, кислотность, свертываемость и Бактериологосерологические исследования крови описываются специальных руководствах по серологии, иммунологии и эпизоотологии Биохимический метод исследования крови также следует рассматривать как самостоятельную область Морфологические методы диагностики гематологии основном основаны на подсчете клеток периферической крови различными методами, изучении их свойств у конкретного животного пункции костного мозга и изучении клеточного состава пунктата Для клинического обследования животных наиболее доступным и пригодным является метод морфологического исследования крови Знание методики гематологического анализа и умение анализировать полученные данные обязательны для ветеринарного врача Нарушения системе крови анемия, лейкопения и многие другие могут быть компонентом и причиной жизнеугрожающих состояний, поэтому тщательное выяснение причины и симптоматическая терапия, если она возможна, проводятся при большинстве отклонений и патологий. Клиническая оценка состояния системы крови у детей возможна лишь при сопоставлении данных объективного обследования ребенка и результатов исследования его периферической крови морфологического исследования, метаболических и иммунологических данных, а при необходимости коагуло и миелограммы.

Клиническое обследование ребенка традиционно предшествует проведению любых дополнительных методов исследования. Наряду с этим используется метод аускультоаффрикции Для этого фонендоскоп помещают над проекцией края железы и производят штриховые движения пальцем по коже, постепенно приближаясь к предполагаемому краю тимуса На месте проекции тимуса отчетливо слышно усиление звука штриховых движений, исчезающее за пределами границ железы. Количество гемоглобина Нb крови новорожденных составляет 160230. При исследовании живых клеток, выяснении функций отдельных органоидов применяют методы микрохирургии, оперативного воздействия на клетку удаление отдельных органоидов или их пересаживание из одних клеток другие, микроинъекции различных веществ и. При изучении живых клеток пытаются их окрашивать с помощью так называемых витальных красителей Это красители кислой трипановый синий, литиевый кармин природы, применяемые при очень большом разведении 1 200000, следовательно, влияние красителя на жизнедеятельность клетки минимальное При окрашивании живых клеток краситель собирается цитоплазме виде гранул, а поврежденных или мертвых клетках происходит диффузное окрашивание цитоплазмы и ядра. Собственной флуоресценцией обладают некоторые пигменты хлорофиллы, бактериальные пигменты, витамины А и В2, гормоны Если во флуоресцентный микроскоп рассматривать клетки растений, то на темносинем фоне будут видны ярко светящиеся красные зерна внутри клетки это хлоропласты. В последнее время начинает широко использоваться для изучения живых клеток или их компонентов сочетание световой микроскопии особенно фазовоконтрастной с электронннокомпьютерной обработкой изображения При этом используется видеозапись с электронной обработкой изображения, которая как бы убирает фоновые уровни и выделяет, контрастирует наблюдаемые структуры Такая методика позволяет на телеэкране видеть такие структуры как микротрубочки, размер которых 20 нм намного меньше разрешающей силы светового микроскопа Применение таких систем не только заменяют цейтраферную киносъемку, вместо которой используется видеозапись, но и позволяет компьютерную обработку изображения сведения о плотности структур, о их параметрах, числе и трехмерной организации В сочетании с флуоресцентной микроскопией эти методы открывают огромные перспективы изучении живых клеток. Строение клетки самом общем виде известно вам еще из курса общей биологии и при подготовке к вступительным экзаменам вы достаточно хорошо штудировали эту тему Эта тема разных аспектах рассматривается и соответствующих университетских курсах например, зоология беспозвоночных, низшие растения Кроме того, более детальное знакомство с клеткой на высоком уровне предстоит курсе цитология Нам же важно акцентировать внимание на специфических особенностях строения растительной клетки, причем преимущественно клетки высшего растения. Размеры и форма растительных клеток варьируются широком диапазоне В типичном случае размеры клеток высшего растения колеблются пределах 10 300 мкм Правда, встречаются клетки гиганты, например, клетки сочной мякоти плодов цитрусовых составляют поперечнике несколько миллиметров или чрезвычайно длинные лубяные волокна у крапивы достигают 80 мм длины при микроскопической толщине.

Принцип метода состоит том, что при центрифугировании развивается центробежная сила, под воздействием которой взвешенные частицы оседают на дно центрифужной пробирки. Этапы дифференциального центрифугирования низкая скорость ядра, цитоскелет, средняя скорость хлоропласты, высокая скорость митохондрии, ризосомы, микротельца, очень высокая скорость рибосомы. Фракционированные клеточные экстракты, называемые также бесклеточными системами, широко используются для изучения внутриклеточных процессов Только работая с бесклеточными экстрактами, можно установить детальный молекулярный механизм биологических процессов Так, использование именно этого метода принесло триумфальный успех изучении биосинтеза белка. Надмембранный комплекс цитоплазматическая мембрана поверхностный аппарат клетки. Поверхностный аппарат образован цитоплазматической мембраной и надмембранным комплексом Поверхностный аппарат ограничивает внутреннее содержимое клеток, защищает его от внешних воздействий, осуществляет обмен веществ между клеткой и внеклеточной средой Надмембранный комплекс клеток растений, грибов и многих протистов представлен плотной, часто многослойной, разнообразной по строению клеточной стенкой оболочкой Клетки животных покрыты только цитоплазматической мембраной. Реферат использование ит исследованиях биофизических свойств клеток крови. Так, среди общих поисковых систем можно отметить Google Scholar Разнообразие критериев поиска, выделение списка наиболее цитируемых авторов, автоматическое нахождение свободных для доступа публикаций что особенно актуально, учитывая значительную стоимость подписки на электронные публикации позволяют сравнительно быстро найти требуемые статьи Тем не менее, можно отметить некоторую разобщенность выдачи результатов поиска. Ряд часто встречающихся патологий тиреотоксикоз, анемия, атеросклероз протекают на фоне гипо или гипер холестеринемии, которая может приводить к изменению доли мембранного холестерина различных типах клеток Изменение содержания холестерина нейтрофилах влечет за собой изменение механических свойств и вязкости их плазматической мембраны, что, свою очередь, может приводить к модификации функциональной активности клеток, так как свойства и функционирование различных мембранных белков и их комплексов рецепторов, ферментов, ионных каналов зависят от состояния мембраны клеток.

Методики исследования, использованные данной работе, достаточно хорошо описаны литературе Флуоресцентная спектроскопия является хорошо изученным методом исследования биосистем Теоретические основы флуоресцентной спектроскопии молекул вошли книгу известного спектроскописта Дж Лаковича 1 Флуоресцентная спектроскопия дает информацию о физикохимических свойствах среды, таких как строение молекул, природа химических связей, межмолекулярные взаимодействия, позволяет определить качественно и количественно состав среды Созданные на основе флуоресцентной спектроскопии, флуориметрические методы анализа позволяют получать информацию о концентрациях веществ исследуемом образце и оценивать кинетические характеристики химических реакций.

 

© Copyright 2017-2018 - articles-seminary.ru